細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室組建的基本要求:
1、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無(wú)菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,干燥和無(wú)煙塵。
3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,為10萬(wàn)級(jí)潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外,避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細(xì)胞潔凈室需要一個(gè)空調(diào)系統(tǒng)并對(duì)外界保持一定的正壓。
4、解剖實(shí)驗(yàn)室主要用于對(duì)器官組織的分離,需要有無(wú)菌操作臺(tái)、解剖顯微鏡、各種手術(shù)器材等。
智能臺(tái)式高速冷凍實(shí)驗(yàn)室離心機(jī) 3H24RI
組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外,尚有一些特殊需要的設(shè)備。基本可分為兩大類:
第一類為常用的基本設(shè)備;
第二類為較高級(jí)的特殊設(shè)備。
1. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常用的基本儀器設(shè)備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無(wú)污染等。
2.培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過(guò)±0.5℃,細(xì)胞在溫度升高2℃ 時(shí),持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
3.干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生li鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
b、低溫冰箱(-20℃)——用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長(zhǎng)時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。
6.細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器:儲(chǔ)存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購(gòu)置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素。
7.離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的國(guó)產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降,使用低速離心機(jī)即可,離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。
臺(tái)式低速離心機(jī)TD5A
8.天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長(zhǎng)因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過(guò)消毒以除去細(xì)菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)用器皿是供細(xì)胞接種、生長(zhǎng)等用的器皿,可由透明度好、無(wú)毒的中性硬質(zhì)玻璃或無(wú)毒而透明光滑的特制塑料制成。細(xì)胞培養(yǎng)中需要的各種耗材,各類細(xì)胞培養(yǎng)板,細(xì)胞培養(yǎng)瓶,平皿移液管等。
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺搿⒓?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品。可供細(xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時(shí)測(cè)試大量樣本,易于進(jìn)行無(wú)菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿
貯液瓶:常見的為藍(lán)蓋瓶,主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、 100ml、50ml、5ml等。
吸管:主要分為刻度吸管、無(wú)刻度吸管??潭任苤饕糜谖?、轉(zhuǎn)移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無(wú)刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。
加樣器(移液器):分為微量移液器和電動(dòng)移液器。用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本。可根據(jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準(zhǔn)確、方便。可保證實(shí)驗(yàn)樣品(或試劑)含量精確,重復(fù)性良好。
其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺(tái)使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
器械
主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時(shí)持取物件。常用的有:手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪(彎剪及直剪),用于解剖動(dòng)物、分離及切剪組織,制備原代培養(yǎng)的材料;眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),用于將組織材料剪成小塊;血管鉗及組織鑷、眼科鑷(彎、直),用于持取無(wú)菌物品(如小蓋玻片)夾持組織等;口腔科探針或代用品,用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。
2、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室特殊設(shè)備
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外,如有條件,可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器,以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如:
(1)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測(cè)等。
(2) 超低溫冰箱(-80℃)——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本。
(3)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。
(4) 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。
(5) 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞。
(6)用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器,例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計(jì)的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測(cè)定儀等。
其余儀器
對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)還可能需要振蕩器及磁力攪拌器用于混勻液體;還有一些沾滿細(xì)胞的難清洗的不銹鋼類或玻璃類器皿,則需要超聲波清洗機(jī)的幫助;如果涉及免疫實(shí)驗(yàn),肯定需要冰浴,碎冰的需求量大的話,則需要購(gòu)買制冰機(jī);另外破碎細(xì)胞可能會(huì)需要超聲波細(xì)胞破碎儀;